Kligler Iron Agar được dùng để định danh Enterobacteria bằng cách phát hiện nhanh quá trình lên men Lactose và Glucose (có hoặc không có sự tạo khí), cũng như tạo khí Hydro sunfua.
NGUYÊN TẮC:
Sự lên men của Lactose và Glucose dẫn đến acid hóa làm cho Phenol (chỉ thị pH) màu đỏ chuyển sang màu vàng được sử dụng để phân biệt các loài vi khuẩn Enterobacteria. Các vi sinh vật không lên men Lactose (Salmonella hoặc Shigella) ban đầu tạo ra màu vàng do sự axit hóa từ một lượng nhỏ Glucose. Khi Glucose mất hết trên mặt nghiêng tiếp xúc với không khí, acid bị oxy hóa, dẫn đến bề mặt môi trường trở lại màu đỏ. Trong khi đó ở đáy ống nghiệm, môi trường vẫn có màu vàng.
Vi khuẩn lên men Lactose và Glucose làm cho cả môi trường ở mặt nghiêng và môi trường dưới đáy ống nghiệm chuyển vàng do tạo một lượng lớn acid đủ để duy trì độ pH acid trên bề mặt môi trường.
Các vi sinh vật không lên men cả hai loại đường này thì không làm thay đổi màu của môi trường.
Phản ứng tạo H2S được biểu hiện ở đáy môi trường dưới dạng sắt sulfide đen, do sắt citrate khử thiosulfate.
Phản ứng tạo khí (H2, CO2) từ sự lên men đường được biểu hiện thông qua các bọt khí hoặc sự nứt agar.